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第281章 变异感染者dna提取（第2页）

4.准备70c温浴。

5.使用前检查bufferbL是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于70c温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。

完成试剂准备工作之后，在钟教授的首肯之下，研究员开始进行dNA的提取。

具体操作步骤如下：

1.向96圆孔板的每孔中加入20ul蛋白酶K。

2.加200ul抗凝全血到96圆孔板中。

~undefined若全血样品体积少于200ul，用pbS补充到200ul。

~undefined若样品为鸟类血，样品用量须低于10ul。

~undefined若需得到RNA-free的基因组dNA，在步骤3加入bufferbL前加入dNase-free的RNaseA（20mgml）。

3.加200ulbufferbL，注意不要打湿每孔的边缘，用96圆孔硅胶片密封各孔。

4.用力混合30s。

5.3000rpm简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rpm后即停止。

6.在培养箱或烘箱中70c温浴至少10min。

7.3000rpm简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rpm后即停止。

8.取下96圆孔硅胶片，每孔加入200ul乙醇（96-100%）。

9.用96圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15s。3000rpm简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rpm后即停止。

10.将96孔dNA板放到一洁净的96孔1.6ml深孔板。取下圆孔板上的96圆孔硅胶片，将每孔中的溶液转移至96孔dNA板中，6000rpm离心4min。

11.丢弃96孔1.6ml深孔板的滤液，将96孔dNA板放回到96孔1.6ml深孔板上，每孔加入500ulbufferw1b，用一新的bF-400膜密封96孔dNA板，6000rpm离心4min。

~undefined确认在bufferw1bconcentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

12.丢弃96孔1.6ml深孔板的滤液，将96孔dNA板放回到96孔1.6ml深孔板上，每孔加入850ulbufferw2，用另一新的bF-400膜密封96孔dNA板，6000rpm离心4min。

~undefined确认在bufferw2concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

13.弃滤液，将96孔dNA板放回到96孔1.6ml深孔板上，每孔加入400ulbufferw2，用另一新的bF-400膜密封96孔dNA板，6000rpm离心4min。

14.将96孔dNA板放在一洁净的96孔1.6ml深孔板上，用bF-400膜密封96孔dNA板，6000rpm离心15min。

15.将96孔dNA板放在另一洁净的96孔1.6ml深孔板上，每孔加入100-200ulEluentb或去离子水，室温静置2min，用另一新的bF-400膜密封96孔dNA板，6000rpm离心4min洗脱得到dNA。

看着最终提取出来的dNA样本，钟教授终于露出了满意的微笑......

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